广州辉骏生物科技股份有限公司

一、内容简介

    microRNAs（miRNAs）是一类内源性的非编码RNA。编码miRNA的基因组DNA首先转录形成长的初始miRNA（pri-miRNA），后经Drosha核糖核酸酶切割形成发夹结构的、约70-90bp的RNA前体（pre-miRNA）。Pre-miRNA又被Dicer酶剪切成约20-25bp的单链成熟miRNA，进而发挥转录后调控作用。
    miRNA过表达载体构建的主要原理是将pri-miRNA或pre-miRNA序列插入polII启动子下游。其中，pri-miRNA（含侧翼序列）的方式保留了每个miRNA特有的天然双臂结构，效果最好。但对于pri-miRNA序列未知的miRNA，更便捷的方法是体外合成pre-miRNA，并构建到带有mir-30侧翼双臂序列的慢病毒载体中。当miRNA表达载体转入细胞后，可产生茎环结构的pri-miRNA或pre-miRNA，进而在细胞内源的miRNA加工机制下被剪切成成熟的miRNA。
二、技术优势

    1、 用途广泛，既可被包装产生miRNA慢病毒，又可以质粒形式直接转染细胞而发挥调控作用。
    2、 pri-miRNA法保留了miRNA的天然双臂结构，更接近体内真实情况，效果最好。
    3、 pre-miRNA法可直接合成pre-miRNA，免去了基因调取的流程，易于通量化。

三、服务内容

    1、 合成pre-miRNA或调取pri-miRNA
    2、 目的序列与miRNA慢病毒载体的连接；
    3、 连接产物的转化；
    4、 测序验证；

四、服务须知


服务项目客户提供交付产物实验周期miRNA过表达慢病毒载体构建（pre-miRNA法）1、pre-miRNA序列
2、指定载体1、miRNA过表达慢病毒载体
2、载体图谱、测序结果2-3周miRNA过表达慢病毒载体构建（pri-miRNA法）1、携带pri-miRNA序列的质粒模板或pri-miRNA序列
2、指定载体1、miRNA过表达慢病毒载体
2、载体图谱、测序结果3-4周
五、实验具体周期及费用：请咨询我司客服人员