一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物链霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗链霉素抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物链霉素的含量。
二、试剂盒特性
试剂盒灵敏度: 0.5ppb
样本检测下限
鸡肉、鸡肝、牛奶—————————————20ppb
蜂 蜜/蜂王浆— —— — —— — —— —————10ppb
交叉反应率
链霉素 — — —— —— — — — — —— — — 100%
双氢链霉素 ——————— —— — — —— —108%
卡拉霉素 —— — — — — — — — — — — — — < 1%
庆大霉素 — — —— — — — — — — — —— — < 1%
回收率
牛 奶— —— —— —— —— —— —— —95±15%
鸡肉组织— —— —— —— —— —— —— —85±10%
蜂蜜/蜂王浆 — —— —— —— —— —— —75±15%
三、试剂盒组成
1、 微量测试孔:每条8孔,一板12条
2、 标准液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶标记物 7ml ……………… 红色帽
4、 抗体工作液 7ml ……………… 蓝色帽
5、 底物液 A液 7ml ……………… 白色帽
6、 底物液 B液 7ml ……………… 黑色帽
7、 终止液 7ml ……………… 黄色帽
8、20×浓缩洗涤液 40ml ……………… 白明帽
9、10×浓缩复溶液 50ml ……………… 透明帽
四、所用仪器、试剂
具备的仪器:微孔板、酶标仪、匀质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:单道 20ul~200ul、100ul~1000ul多道 250 ul
试 剂:浓磷酸、氢氧化钠、Na2HPO4?12H2O、NaH2PO4?2H2O、正己烷
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制:
配液1、将浓缩复溶液用去离子水按1:9稀释(1份浓缩复溶液+9份去离子水)。
配液2、0.05M PB溶液
13.0gNa2HPO4?12H2O+2.2gNaH2PO4?2H2O加去离子水定溶至1L。
配液3、0.04M磷酸溶液
1ml浓磷酸加去离子水定溶至360ml。
配液4、1M NaOH溶液
称取4g NaOH加去离子水定溶至100ml。
(a)牛奶样本的处理方法
1、 取牛奶1ml,按1:39稀释,混合30s。(50 ul牛奶+1950 ul稀释后的复溶液)
2、 取50ul用于分析。
稀释倍数:40
(b)鸡肉、鸡肝样本的处理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的匀浆样本与8ml 0.05MPB缓冲液混合5min,置56℃水浴环境放置30min;
2、 室温4000r/min以上,离心10min;
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷,充分混匀,室温4000r/min以上,离心5min
4、 去上层液体取50ul下层液,加入450ul&nbs