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延伸拓展
详情介绍:3.建了带有His标签(pCzn1-His原核表达载体)和Sumo标签的特色质粒,同时筛选了低温诱导体系的ArcticExpress高效表达菌株,可以在11℃超低温诱导表达,大大提高了重组蛋白表达纯化服务的几率,增加了表达成功率和原核蛋白产物的活性几率。第二代自主研发的核心表达载体pCzn2,携带pelB信号肽,分泌表达蛋白至细胞周质,配合自诱导体系,从根本上提高上清表达概率及原核蛋白产物活性,同时避免了IPTG给细胞带来的毒害作用,满足工业化大生产的需求。首先,重组蛋白表达纯化服务包括很多种类型,比如原核蛋白表达,哺乳动物蛋白表达,酵母蛋白表达以及昆虫蛋白表达等等,而现在生物实验中常说的蛋白表达纯化通常是指利用大肠杆菌表达系统的原核蛋白表达,这种重组蛋白表达纯化服务表达方式比较简单,普遍都可以做。但是如果是指很多种蛋白表达系统的话,可以做的单位就比较少了。重组蛋白表达纯化服务如果是分泌表达的蛋白,则取上清,超滤,没有超滤仪器可以用透析袋等代替,用离子交换柱层析。基本上这一步能得到纯化的95%的蛋白,电泳鉴定基本不会看到有杂带出现。如果还是纯度不符合要求,可以在重组蛋白表达纯化服务最初在构建表达载体质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS-标签,这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化,在不确定自己的融合蛋白是否有表达的时候,也可以单单用抗HIS的抗体做一WB,分析确认目的蛋白是否表达,这是蛋白表达的常用手段。
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